Kit de PCR em tempo real do vírus Monkeypox

Pequena descrição:

Gato.Não	B001P-01	Tamanho	48 testes/kit
Amostra	Soro/Exsudato da Lesão	Trad.& Sto.Temperatura.	-25~-15℃
Formatar	A pré-mistura foi liofilizada e dividida em alíquotas em tubos de PCR de 8 tiras
Instrumento Aplicável	Instrumentos de PCR em tempo real, como ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio e BTK-8

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Uso pretendido

É usado para a detecção do vírus Monkeypox em amostras de soro humano ou exsudato de lesões usando sistemas de PCR em tempo real.

Princípio do teste

Este produto é um sistema de ensaio de PCR em tempo real Taqman® baseado em sonda fluorescente.Primers e sondas específicos são projetados para a detecção do gene F3L do vírus Monkeypox.O controle interno direcionado ao gene humano conservado monitora a coleta de amostras, o manuseio das amostras e o processo de PCR em tempo real para evitar resultados falso-negativos.O kit é um sistema liofilizado totalmente pré-misturado, que inclui materiais necessários para a detecção do vírus Monkeypox: enzima de amplificação de ácido nucleico, enzima UDG, tampão de reação, primer específico e sonda.

Conteúdo Principal

Os componentes fornecidos estão listados na tabela.

Componentes	Pacote	Ingrediente
Vírus da varíola dos macacosPré-mistura liofilizada	8 tubos PCR de tira× 6 bolsas	Primers, sondas, mistura dNTP/dUTP, Mg2+, Taq DNA polimerase, enzima UDG
Controle Positivo de MPV	Tubo de 400 μL×1	Sequências de DNA contendo gene alvo
Controle Negativo MPV	Tubo de 400 μL×1	Sequências de DNA contendo segmento genético humano
Solução Dissolvente	1 mL×1 tubo	Estabilizador
Certificado de conformidade	1 pedaço	/

Fluxo de Operação

1. AmostraColeção:A amostra deve ser coletada em tubos estéreis de acordo

com especificações técnicas padrão.

2. Preparação de Reagentes (Área de Preparação de Reagentes)

Retire os componentes do kit, equilibre-os em temperatura ambiente para uso em espera.

3. Processamento de Amostras (Área de Processamento de Amostras)

3.1 Extração de ácido nucleico

Recomenda-se a coleta de amostras líquidas de 200μL, Controle Positivo e Controle Negativo para extração de ácido nucleico, de acordo com os requisitos e procedimentos correspondentes dos kits de extração de DNA viral.

3.2 Dissolução do pó liofilizado e adição de molde

Prepare a pré-mistura liofilizada do vírus Monkeypox de acordo com o número de amostras.Uma amostra precisa de um tubo PCR contendo pó pré-misturado liofilizado.O controle negativo e o controle positivo devem ser tratados como duas amostras.

(1) Adicione 15 μL de solução dissolvida em cada tubo de PCR contendo pré-mistura liofilizada e, em seguida, adicione 5 μL de amostras extraídas/controle negativo/controle positivo em cada tubo de PCR, respectivamente.

(2) Cubra bem os tubos de PCR, agite os tubos de PCR com a mão até que o pó liofilizado esteja completamente dissolvido e misturado, colete o líquido no fundo dos tubos de PCR por centrifugação instantânea em baixa velocidade.

(3) Se usar um instrumento comum de PCR em tempo real para detecção, transfira diretamente os tubos de PCR para a área de amplificação;se usar BTK-8 para detecção, será necessário realizar as seguintes operações: transferir 10 μL de líquido do tubo PCR para o poço do chip de reação do BTK-8.Um tubo PCR corresponde a um poço no chip.Durante a operação de pipetagem, certifique-se de que a pipeta esteja 90 graus vertical.As pontas das pipetas com barreira de aerossol devem ser colocadas no centro do poço com força moderada e parar de empurrar a pipeta quando atingir a primeira marcha (para evitar bolhas).Após o preenchimento dos poços, retire uma membrana do chip de reação para cobrir todos os poços e o chip é então transferido para a área de detecção de amplificação.

4. Amplificação PCR (Área de Detecção)

4.1 Coloque os tubos PCR/chip de reação no tanque de reação e defina os nomes de cada poço de reação na ordem correspondente.

4.2 Configurações de fluorescência de detecção: (1) vírus Monkeypox (FAM);(2) Controle Interno (CY5).

4.3 Execute o seguinte protocolo de ciclagem

Protocolo de ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

Passos		Temperatura	Tempo	Ciclos
1	Pré-desnaturação	95°C	2 minutos	1
2	Desnaturação	95°C	10s	45
2	Recozimento, extensão, aquisição de fluorescência	60°C	30 segundos	45

Protocolo de BTK-8:

Passos		Temperatura	Tempo	Ciclos
1	Pré-desnaturação	95°C	2 minutos	1
2	Desnaturação	95°C	5 segundos	45
2	Recozimento, extensão, aquisição de fluorescência	60°C	14s	45

5. Análise de resultados (consulte o Manual do Usuário do Instrumento）

Após a reação, os resultados serão salvos automaticamente.Clique em “Analisar” para analisar e o instrumento interpretará automaticamente os valores Ct de cada amostra na coluna de resultados.Os resultados de controle negativo e positivo devem estar em conformidade com o seguinte "6. Controle de Qualidade".

6. Controle de qualidade

6.1 Controle Negativo: Sem Ct ou Ct>40 no canal FAM, Ct≤40 no canal CY5 com curva de amplificação normal.

6.2 Controle Positivo: Ct≤35 no canal FAM com curva de amplificação normal, Ct≤40 no canal CY5 com curva de amplificação normal.

6.3 O resultado é válido se todos os critérios acima forem atendidos.Caso contrário, o resultado é inválido.

Interpretação do resultado

Os seguintes resultados são possíveis:

	Valor Ct do canal FAM	Valor Ct do canal CY5	Interpretação
1#	Sem Ct ou Ct>40	≤40	Vírus Monkeypox negativo
2#	≤40	Quaisquer resultados	Vírus Monkeypox positivo
3#	40~45	≤40	Teste novamente;se ainda estiver entre 40 e 45, relate como 1#
4#	Sem Ct ou Ct>40	Sem Ct ou Ct>40	Inválido

OBSERVAÇÃO: Se ocorrer um resultado inválido, a amostra precisa ser coletada e testada novamente.

Informações do pedido

Nome do Produto	Gato.Não	Tamanho	Amostra	Validade	Trad.& Sto.Temperatura.
Kit de PCR em tempo real do vírus Monkeypox	B001P-01	48 testes/kit	Soro/Exsudato da Lesão	12 meses	-25~-15℃